胚胎移植也稱為受精卵移植，是將一頭良種母牛配種后的早期胚胎用沖洗子宮的方法取出，或是經(jīng)體外受精獲得的胚胎，移植到另一頭同種的、生理狀態(tài)相同的母牛體內(nèi)，使之繼續(xù)發(fā)育成為新個體，通俗稱為“借腹懷胎”或“人工受胎”。提供胚胎的個體稱為供體，而接受胚胎的個體稱為受體。

　　胚胎移植產(chǎn)生的后代的遺傳特性受供體母畜和與之交配的公畜決定，而受體母畜只提供其胚胎發(fā)育期間的營養(yǎng)。因此，胚胎移植在充分發(fā)揮優(yōu)良高產(chǎn)奶牛的繁殖潛力，提高繁殖效率，加速牛群品種發(fā)育，誘發(fā)母牛產(chǎn)雙胎，擴大良種牛群等方面具有重要重義。另外也是胚胎生物工程技術(shù)實施的重要手段。

牛胚胎移植的主要技術(shù)環(huán)節(jié)包括：供體、受體的選擇，供體、受體的發(fā)情同期化，超數(shù)排卵，胚胎的采集，胚胎檢查、質(zhì)量鑒定，胚胎冷凍保存和胚胎移植。牛胚胎移植技術(shù)程序見上圖。

　　(1)供體、受體母牛的選擇

　�、俟�體母牛的選擇：選擇具有較高的種用價值，遺傳性能好，身體健康，無生殖器官疾病，發(fā)情周期正常，生殖機能處于較高水平，年齡在3—10歲的經(jīng)產(chǎn)母牛。

　�、谑荏w母牛的選擇：受體牛僅作為借腹懷胎，不要求遺傳性狀，但發(fā)情周期必須正常，生殖器官無疾病，體形大且健康，可用廉價低產(chǎn)的青年奶牛或黃牛作受體。

　　(2)供體、受體母牛的發(fā)情同期化處理  由于在發(fā)情周期內(nèi)，母牛的生理變化很大，供體和受體的生理狀況要趨于一致，否則移植后的胚胎不能存活。因此，要求供體、受體母牛在發(fā)情時間上要相同或相近，前后不宜超過1天。由于在生產(chǎn)中難以選擇到與供體發(fā)情時間相同的足夠數(shù)量的自然發(fā)情的受體，所以一般情況下要對供體和受體進(jìn)行同期發(fā)情處理。

　　(3)供體母牛的超數(shù)排卵  一般情況下，母牛的一個發(fā)情周期中只排出一個成熟的卵子。為了提高良種母牛的利用效果，要對供體母牛進(jìn)行超數(shù)排卵處理。超數(shù)排卵是利用外源促性腺激素，增進(jìn)卵巢的生理活性，比在自然情況下，激發(fā)多量卵泡在一個發(fā)情期中成熟排卵。主要使用促卵泡素(FSH)或孕馬血清促性腺激素(PMSG)和前列腺素(PG)，以及促黃體素(LH)、人絨毛膜促性腺激素(HCG)等進(jìn)行處理。

　　幾種超數(shù)排卵的方法：

　　①促卵泡素+前列腺素F2α  (一般用氯前列烯醇)在發(fā)情后的第9～13天進(jìn)行，肌注促卵泡素50毫克，肌注或子宮注入前列腺素F2α 4～5毫克(子宮注入量減半)。促卵泡素處理采用遞減法，以7毫克、6毫克、5毫克、4毫克、3毫克遞減，每日分上、下午2次注射，共連續(xù)注射5天。在第3天與注射促卵泡素同時注射前列腺素4～5毫克，第5天下午進(jìn)行第一次輸精，第6天上午做第2次輸精。

　�、谠旭R血清促性腺激素+前列腺素F2α  用藥時間同上，孕馬血清促性腺激素肌肉注射1500—3000國際單位48小時后，肌注或子宮注入前列腺素F2α  4—5毫克。輸精時間在前列腺素處理后48小時，每隔10～12小時輸精1次，共輸2—3次。

　　(4)胚胎的收集  胚胎收集指的是利用沖卵液將早期胚胎從供體母牛的子宮角內(nèi)沖出來，并收集于一定的器皿中。胚胎收集方法有手術(shù)法和非手術(shù)法兩種，現(xiàn)普遍采用非手術(shù)法。一般在供體母牛發(fā)情配種后6～7天內(nèi)收集胚胎，胚胎處于致密桑椹期和囊胚期。此方法簡便易行，對生殖道的損傷的危險性小，收集效果比較好。

　　首先將供體牛保定，體位前高后低，便于操作和胚胎沖出。尾根處(第3—4尾椎)剪毛，酒精消毒，注射2％普魯卡因2～3毫升或2％～4％鹽酸利多卡因2～4毫升等進(jìn)行尾椎硬膜外麻醉。如牛不安寧可肌注2％靜松靈2—4毫升。直腸檢查卵巢大小、子宮狀況，估計黃體數(shù)量。清洗外陰部，用消毒液消毒。

　　非手術(shù)沖取胚胎所用的沖卵管有二路式和三路式，其不同之處是沖卵液注入和導(dǎo)出的管道，二路式是同一管道，而三路式則各有進(jìn)出兩個管道。另外兩種沖卵管都有一注入空氣的管道，使之沖卵時，可將子宮角內(nèi)腔基部固定。但氣囊充氣應(yīng)適度，過于膨脹易損傷子宮內(nèi)膜，過小則不能固定沖卵管，使子宮留有間隙，沖卵液由陰道流出。

　　一般每側(cè)子宮角需沖卵液500毫升，沖卵液溫度保持在37~C，沖卵液的導(dǎo)出應(yīng)順暢，進(jìn)出液量要相當(dāng)，因此，操作時，可用手隔著直腸壁將子宮提高，促進(jìn)液體回流。收集到的沖卵液，置于37~C無菌間待檢。收集胚胎的沖卵液目前多采用改良的杜氏磷酸緩沖液(mPBS)，此液可用于沖洗胚胎，也可用于胚胎的保存液和培養(yǎng)液。配制方法簡單，成本低，比較適用。

　　(5)胚胎的檢查和級別劃分  將收集到的沖卵液靜止10～30分鐘，待胚胎下沉后，將上層液吸出，剩余的沉淀液體(約50毫升)分別倒入幾個檢卵杯中，置于體視顯微鏡下將胚胎檢出。檢查時要求仔細(xì)快捷，不要丟失胚胎，在30分鐘以內(nèi)檢查完畢，以防顯微鏡光源溫度高，而使載物臺溫度上升，從而影響了胚胎質(zhì)量。

　　將收集到的胚胎，置于高倍鏡下觀察其形態(tài)和發(fā)育時期。正常發(fā)育的胚胎，卵裂球整齊清晰，大小較一致，分布均勻而緊密，透明帶完整，發(fā)育速度與胚胎日齡相一致。而沒有受精、透明帶內(nèi)卵裂球異常、透明帶破損等為不可用胚胎。

　　目前對胚胎的質(zhì)量鑒定基本上采用形態(tài)學(xué)的方法，將胚胎分為A級(優(yōu)秀胚)、B級(良好胚)、C級(一般胚)、D級(不良胚)四個級別。其中，A級和B級胚胎為移植可利用胚胎。

　　A級：發(fā)育形態(tài)正常，卵裂球致密、整齊、清晰，發(fā)育速度與日齡一致。

　　B級：卵裂球稍微不勻，比較致密、整齊，有個別卵裂球游離。

　　C級：卵裂球不十分勻稱，變形，發(fā)育較慢。

　　D級：卵裂球多數(shù)變形、異常，發(fā)育緩慢。

　　(6)胚胎的移植  牛的胚胎移植方法有手術(shù)和非手術(shù)移植兩種，目前多采用非手術(shù)移植法。使用特制的胚胎移植器，通過陰道和子宮頸，將胚胎注入到子宮角的一定部位。其操作過程如下：

　　①受體牛的保定和消毒：與供體牛處理方法相同。

　�、谂咛サ南礈旌头庋b：將鑒定的優(yōu)良胚胎用新鮮的保存液洗滌2～3次，以除去附著的黏液、雜質(zhì)等，然后將胚胎封裝于0．25毫升的塑料細(xì)管中。封裝時，先在細(xì)管內(nèi)吸入保存液大約5厘米長度，然后使管內(nèi)形成0．5厘米的空氣層，再吸入含有保存液的胚胎大約2．5厘米長度，再形成0．5厘米的空氣層，最后吸入保存液直至管端。胚胎裝入后，必須將細(xì)管放在顯微鏡下檢查，以確定胚胎是否在管中。

　　③移植胚胎：將封裝好胚胎的細(xì)管，開口一端(遠(yuǎn)離棉芯的一端)向內(nèi)裝入移植器中。直腸檢查受體牛卵巢排卵一側(cè)的黃體質(zhì)地，通過直腸把握子宮頸，將移植器送入子宮頸，再直腸把握子宮角，把移植器輕輕推入有黃體一側(cè)的子宮角，并使其深入到子宮角的大彎部，隨后將胚胎推入并緩慢取出移植器。操作時注意動作要穩(wěn)、快、移植部位要準(zhǔn)確，移植后檢查細(xì)管，看有無胚胎遺漏。如有遺漏，則需重新移植。

　　(7)供體和受體的術(shù)后觀察  胚胎移植后要注意觀察供體和受體的健康狀況和在預(yù)定的時間內(nèi)是否發(fā)情。對于供體牛，在下一次發(fā)情即可配種，如仍要做供體則一般要經(jīng)過2—3個月才可超排卵。對于受體牛，如移植后發(fā)情，則表明移植失敗，可能胚胎丟失、死亡、吸收或有缺陷，也可能是受體牛的子宮環(huán)境不相適宜；如未發(fā)情，也要繼續(xù)觀察3～5個情期，并在適宜時期進(jìn)行妊娠診斷。